大肠杆菌翻译起始因子IF1的生物信息学分析、表达载体构建及蛋白纯化

作者：徐本锦^*; 刘玲

来源：基因组学与应用生物学, 2020, 39(12): 5606-5616.

DOI：10.13417/j.gab.039.005606

• 大肠杆菌(Escherichia coli)
• IFI
• 蛋白表达
• 生物信息学分析

为了解大肠杆菌IF1在pET22b载体上的表达特性,优化蛋白表达条件并建立纯化策略,进一步揭示其在细胞生命活动中的功能机制。本研究构建了大肠杆菌infA基因的原核表达载体pET22b-infA,优化表达条件并纯化出IF1蛋白,通过生物信息学手段对IF1进行了系统分析。结果表明,过表达载体构建正确,IF1主要在裂解后的上清液中表达,镍柱初步纯化后IF1主要分布于50 mmol/L、100 mmol/L和200 mmol/L的咪唑洗脱液中。分子筛二次纯化后发现,IF1蛋白纯度高,无降解。IF1是一个由72个氨基酸组成的碱性蛋白,等电点为9.22,不稳定指数为37.35,半衰期大于10 h,含有一个S1样RNA结合结构域,13个rRNA结合位点,6个可能的磷酸化位点,是一种无跨膜螺旋的亲水性蛋白。多序列比对和进化分析显示,沙门氏菌与大肠杆菌IF1的序列一致性最高,并且亲缘关系最近;其次是假结核耶尔森菌。本研究为细菌翻译起始因子的表达和纯化摸清了条件,为后续的翻译相关功能实验和三维结构分析提供了材料准备,同时有助于揭示IF1的确切功能及翻译起始机制。

• 单位
  山西医科大学汾阳学院