利用mRNA技术制备人CD5蛋白多克隆抗体

作者：徐一艳; 龙薇; 许敏婕; 刘滨磊^*

来源：生物技术, 2023, 33(06): 671-771.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2023.06.0101

• mRNA技术
• 人CD5
• 体外转录
• 脂质纳米颗粒
• 多克隆抗体

[目的]体外合成人CD5(human CD5,hCD5) mRNA,以包封后的hCD5 mRNA作为免疫原，制备并鉴定兔抗hCD5多克隆抗体。[方法]用RT-PCR从Jurkat细胞中扩增出hCD5基因胞外域序列，构建重组质粒pT7kan hCD5,经体外转录和脂质体包封获得LNP-hCD5 mRNA,免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体，用间接ELISA、Western Blot、流式细胞术等方法检测抗体的生物学活性。[结果]成功构建重组质粒pT7kan hCD5,动物免疫LNP-hCD5 mRNA后产生的多克隆抗体具有良好的生物学活性。血清抗体效价可达到1∶625 000,Western Blot结果显示纯化后的抗体能特异性识别hCD5蛋白，流式鉴定显示纯化后的抗体能特异性识别天然形式的hCD5蛋白。[结论]用mRNA技术所制备的羊抗hCD5多克隆抗体具有高效价和特异性，为检测天然形式的hCD5蛋白奠定了基础。

• 单位
  武汉滨会生物科技股份有限公司; 湖北工业大学