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摘要
由指状青霉侵染引起的果实绿霉病是导致柑橘采后腐烂变质的重要原因之一，研发新型作用靶点的杀菌剂对安全有效的防控柑橘采后真菌病害具有重要意义。V-ATP酶的H亚基蛋白（V-ATPase membrane subunit H， VMAH）是真核生物V型ATP酶的关键亚基蛋白，在维持细胞内pH稳态过程中发挥重要作用，是新药研发的潜在作用靶点。本文旨在通过基因干扰和过表达技术，研究VMAH蛋白在柑橘绿霉病菌指状青霉生长中的生理功能及其作为抗柑橘绿霉病药物作用靶点的可行性。方法：采用菌丝生长法和孢子萌发法研究沉默和过表达VMAH基因对正常和胁迫条件下指状青霉细胞生长特性的影响。结果：在正常生长条件下，沉默VMAH基因显著抑制了指状青霉菌丝体的生长；而过表达VMAH基因对菌体生长表现出显著的促进作用。在不同pH环境下，沉默VMAH基因显著抑制了指状青霉菌丝的生长，尤其在偏酸性（pH低于2）和偏碱性（pH高于8）条件下尤为显著；而过表达VMAH基因在一定程度上促进了菌体菌丝的生长，pH为6时，其促进作用最显著。与野生株相比，沉默VMAH基因对胞外Ca2+、Cu2+、Fe2+等金属离子胁迫处理较为敏感。VMAH基因沉默菌株对质子泵抑制剂类杀菌剂的敏感性显著增加，尤其V-ATP酶专一性抑制剂巴佛洛霉素A1最为明显；而VMAH基因过表达菌株对质子泵抑制剂类杀菌剂的敏感性显著降低。结论：VMAH在指状青霉生长过程中发挥重要作用，是研发低耐药性柑橘采后杀菌剂的潜在作用靶点。
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