cTnC-linker-TnI(P)基因的构建、融合蛋白表达及冻干品的制备

作者：宋晓丽; 刘晓云; 才蕾; 武建伟; 王继华

来源：生物医学工程学杂志, 2015, 32(06): 1267-1272.

• 急性心肌梗死
• 人心肌肌钙蛋白
• cTnC-linker-TnI(P)
• 原核表达
• 冻干品

从GenBank中检索人源心肌肌钙蛋白C亚基(cTnC)和心肌肌钙蛋白I亚基(cTnI)编码序列,合成cTnC和cTnI第30至110氨基酸基因-cTnI(P),并在两者之间合成一段由15个氨基酸(G4S)3组成的接头(linker)序列。构建原核表达载体pColdⅠ-cTnC-linker-TnI(P),转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,结果在大肠杆菌中成功实现了cTnC-linker-TnI(P)融合蛋白的稳定可溶性高表达。经Ni 2+柱纯化后得到纯度大于95%的cTnC-linker-TnI(P)融合蛋白,制备冻干品并采用万孚飛测?心肌肌钙蛋白I(cTnI)定量检测试剂盒检测其稳定性。cTnC-linker-TnI(P)冻干品在37℃可稳定保存10d以上,25℃、4℃稳定保存4个月以上。本研究获得的cTnC-linker-TnI(P)融合蛋白活性高,冻干品稳定性好,为后续研究提供了稳定高效的生物原材料。

• 单位
  广州正孚检测技术有限公司; 广州万孚生物技术股份有限公司