食品中人星状病毒的定量检测方法

作者：徐蕾蕊; 李丹; 魏咏新; 马丹; 魏海燕; 汪琦; 张西萌; 付溥博; 刘莉; 赵晓娟; 曾静^*

来源：中国食品学报, 2021, 21(01): 300-308.

DOI：10.16429/j.1009-7848.2021.01.036

• 人星状病毒
• 定量检测
• 一步法反微滴数字PCR
• 回收率

目的:应用一步法微滴数字PCR方法(RT-ddPCR),建立一种食品中人星状病毒(HAstV)定量检测方法。方法:筛选引物探针,建立HAstV RT-ddPCR方法;利用其它常见食源性病毒RNA,确定特异性;梯度稀释HAV RNA标准样品确定检测限、准确度和重复性。用已知效价的MS2噬菌体制备人工污染样品,研究RT-ddPCR方法在不同种类食品基质中的检测限和回收率,比较2种RNA提取方法的病毒检出量。结果:HAstV RT-ddPCR方法准确度、灵敏度和重复性良好,检测限105～100拷贝/μL,最低定量限5拷贝/μL;不同种类食品基质的检测限分别为7.2×106～3 600拷贝(贝类消化腺),7.2×106～3 600拷贝(硬表面食品),7.2×106～7 200拷贝(生食蔬菜)、7.2×107～7 200拷贝(软质水果);高浓度污染剂量时,Trizol裂解结合磁珠纯化方法病毒检出量显著低于Trizol裂解提取方法(P<0.05);不同种类食品基质中模拟病毒回收率存在显著差异(P<0.05)。结论:本研究建立的食品中HAstV定量检测方法可有效定量检测HAstV,可通过病毒回收率计算样品中HAstV的实际载量。