乳腺癌细胞来源外泌体miR-181a-5p对恶病质肌肉萎缩的影响

作者：陈文馨; 皮美辰; 孙圣荣^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2022, 36(10): 1012-1016.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2022.10.010

• 乳腺癌
• 外泌体
• miR-181a-5p
• N-myc下游调节基因2
• 恶病质
• 肌肉萎缩
• 4T1细胞
• C2C12细胞

目的 探讨乳腺癌细胞来源外泌体miR-181a-5p对恶病质肌肉萎缩的影响及可能机制。方法 小鼠乳腺癌细胞4T1、小鼠正常乳腺细胞HC11分别采用条件培养基培养并从中分离纯化外泌体，采用Western blot法检测4T1细胞、HC11细胞外泌体肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101, TSG101)、CD63、CD9、高尔基体基质蛋白(Golgi matrix protein, GM130)相对表达量，采用实时荧光定量PCR法检测miR-181a-5p相对表达量。小鼠成肌细胞C2C12分化为肌管细胞后分为对照组(正常培养)、条件培养基组(与4T1细胞培养基共培养)和细胞松弛素D(cytochalasin D, cytoD)组(胞吞抑制剂cytoD处理细胞后与4T1细胞培养基共培养),采用Western blot法检测肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MHC)、肌萎缩蛋白-1(Atrogin-1)蛋白相对表达量。取人胚胎肾细胞HEK293T,采用荧光素酶报告基因实验验证miR-181a-5p与N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2, NDRG2)的靶向关系。C2C12肌管细胞分为空白对照组(不进行转染)、miR-181a-5p过表达组(转染miR-181a-5p mimic)、阴性对照组(转染miR-NC)、NDRG2敲低组(转染NDRG2 siRNA),采用Western blot法检测4组细胞MHC、Atrogin-1、NDRG2蛋白相对表达量。结果 4T1细胞外泌体miR-181a-5p相对表达量(0.91±0.07)及TSG101、CD63、CD9蛋白相对表达量(1.51±0.03、1.46±0.08、1.43±0.06)均高于HC11细胞(0.40±0.04、0.83±0.08、0.79±0.43、0.70±0.03)(P<0.05),GM130蛋白相对表达量(0.46±0.03)低于HC11细胞(1.14±0.05)(t=17.160,P<0.001)。条件培养基组细胞MHC蛋白相对表达量(0.86±0.17)低于对照组(1.59±0.08)、cytoD组(1.34±0.07)(P<0.05),Atrogin-1蛋白相对表达量(1.12±0.05)高于对照组(0.77±0.05)、cytoD组(0.87±0.03)(P<0.05);cytoD组细胞MHC、Atrogin-1蛋白相对表达量与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-181a-5p靶向NDRG2。miR-181a-5p过表达组、NDRG2敲低组细胞MHC(1.17±0.09、0.73±0.08)、NDRG2(0.73±0.06、0.59±0.05)蛋白相对表达量均低于阴性对照组(1.52±0.11、1.64±0.09)、空白对照组(1.86±0.07、1.37±0.06)(P<0.05),Atrogin-1蛋白相对表达量(0.99±0.06、0.89±0.08)均高于阴性对照组(0.49±0.03)、空白对照组(0.53±0.10)(P<0.05);阴性对照组细胞MHC、Atrogin-1、NDRG2蛋白相对表达量与空白对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 乳腺癌4T1细胞来源的外泌体miR-181a-5p靶向结合并下调NDRG2蛋白表达，加重C2C12肌管萎缩，促进恶病质进展。

• 单位
  武汉大学人民医院