肺炎链球菌表面黏附素A的原核表达和抗原性分析

作者：章德广; 王正敏; 徐江红; 陈兵; 戴文佳; 李忠明

来源：中国眼耳鼻喉科杂志, 2009, (01): 20-22.

DOI：10.14166/j.issn.1671-2420.2009.01.006

• 中耳炎
• 链球菌,肺炎
• 疫苗
• 肺炎球菌菌苗

目的应用基因工程技术制备肺炎链球菌表面黏附素A(pneumococcal surface adhesin A,PsaA),并分析其抗原性。方法根据基因库中报道的psaA基因序列,从肺炎链球菌基因组中扩增出psaA基因,连接到原核表达载体pET28a中,构建出重组质粒pET28a-psaA,转化大肠杆菌BL21(DE3),采用镍柱亲和层析法纯化PsaA蛋白,Western-blot分析其抗原性。结果克隆出的psaA基因同基因库中报道的psaA基因序列一致。成功构建出重组质粒pET28a-psaA,基因测序证实重组质粒构建正确。成功表达和纯化出PsaA蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示蛋白分子量为37-kDa,最终得到纯度较高的蛋白,主要以可溶性形式存在,Western-blot分析显示在37-kDa处见到目的蛋白条带。结论利用基因工程技术可以克隆出psaA基因,并成功表达和纯化出PsaA蛋白,其抗原性良好。

• 单位
  海规生物科技(上海)有限公司; 复旦大学