致病疫霉PITG＿02860基因沉默及功能鉴定

作者：王娜; 张杨倩; 谭晨; 徐裴; 罗展宏; 高建莉; 唐唯^*; 刘晶^*

来源：农业生物技术学报, 2023, 1-11.

• 致病疫霉
• 原生质体
• 转化
• 基因沉默
• 有性生殖

交配型是卵菌重要性状，致病疫霉(Phytophthora infestans)效应子PITG＿02860和A1交配型性状分离连锁。为进一步探索PITG＿02860基因功能，本研究首先改良了致病疫霉原生质体转化技术，以碗豆汁培养72 h的菌丝，采用复合酶(裂解酶, 10 mg/mL;纤维素酶, 5 mg/mL)于26℃裂解45 min，原生质体制备率最高，为(31.5±2.36)个/μL；原生质体在黑麦培养基上再生率可达(3.34±0.20)%。依托该转化系统，以载体pTOR-mRFP为骨架，构建PITG＿02860基因沉默载体并转化致病疫霉88069菌株，对2个阳性沉默子进行功能验证，发现与野生型相比，沉默子有性生殖产生的卵孢子数量显著下降且卵孢子畸形率显著增高(P<0.05)，菌丝生长受阻，游动孢子数量显著下降(P<0.05)，对马铃薯(Solanum tuberosum)叶片致病能力显著降低(P<0.05)。上述结果表明，PITG＿02860不仅是致病疫霉有性生殖正常发生的关键基因，也是侵染马铃薯的重要毒性功能基因。本研究为明确致病疫霉有性生殖发生和解析致病疫霉对马铃薯的毒性机制提供了新思路。

• 单位
  生命科学学院; 云南师范大学; 农业科学院