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摘要
目的大鼠血清在中药稳斑汤干预下,检测其中巨噬细胞泡沫化自噬及凋亡相关蛋白Beclin1、Bcl2和Caspase3的表达变化,探讨中药稳斑汤防治冠状动脉粥样硬化机制。方法取20只体质量200～250 g的SD大鼠,随机分成空白对照组、稳斑汤低浓度组、稳斑汤中浓度组、稳斑汤高浓度组,每组各5只,每天一次分别灌胃不同浓度稳斑汤[药物低、中、高剂量组分别为4.275、8.55、17.1 g·(kg·d)-1],空白对照组每日一次灌胃相同体积蒸馏水4 mL,连续灌胃7 d。在第8天取大鼠腹主动脉血,离心后分离血清。在体外培养小鼠巨噬细胞,分为空白对照组、标准组、低浓度组、中浓度组、高浓度组及西药雷帕霉素组,每组6孔,除空白对照组外其余各组均进行巨噬细胞泡沫化处理。空白对照组及标准组均给予大鼠质量分数10%空白血清培养,各浓度组分别给予质量分数10%稳斑汤对应浓度血清每孔200μL,西药雷帕霉素组给予雷帕霉素每孔10μL(终浓度10 nmol·L-1),培养48 h,观察各组巨噬细胞自噬体变化,用Western Blot法检测各组Beclin1、Caspase3和Bcl2表达水平。结果空白对照组没有产生自噬体,标准组产生少量自噬体,大量自噬体产生在稳斑汤各浓度组及雷帕霉素组中,其中雷帕霉素组产生自噬体更多。其余各组细胞凋亡率比空白对照组升高(P<0.05);低浓度组、中浓度组、高浓度组、雷帕霉素组的细胞凋亡率比标准组下降(P<0.05);高浓度组的细胞凋亡率与雷帕霉素组无明显差异(P>0.05)。雷帕霉素组及稳斑汤各组比空白对照组Beclin1、Bcl2表达上调,Caspase3表达下降(P<0.05),雷帕霉素组及稳斑汤各组比标准组Beclin1、Bcl2表达上调,Caspase3表达下降(P<0.05),与雷帕霉素组相比,稳斑汤高浓度组Beclin1、Bcl2和Caspase3的表达与雷帕霉素组无统计学差异(P>0.05)。结论稳斑汤含药血清可以促进泡沫化巨噬细胞自噬体增加,使Beclin1、Bcl2表达上调,Caspase3表达下降,抑制泡沫化的巨噬细胞的凋亡,可能延缓动脉硬化进程,作为防治动脉粥样硬化机制之一。
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