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摘要
目的:有效弥补传统微生物学检验方法的缺陷。方法:针对GB 8538—2022中铜绿假单胞菌的毒力基因pcrL和16S rRNA基因的V3～V4区保守序列设计合成引物和探针，建立实时荧光PCR方法。结果:该方法可以有效扩增常见标准储备菌株的16S rRNA基因，且对铜绿假单胞菌标准储备菌株的毒力基因pcrL的检测效果良好，观察到明显的“S”型扩增曲线，但对常见的食源性致病菌无扩增曲线。当菌液浓度<10 CFU/mL时，pcrL基因仍有扩增曲线，其检测范围为10～107 CFU/mL,检测限为10 CFU/mL;不同菌液浓度下毒力基因pcrL的Ct平均值为18.0～38.6。对近3年湖南省14个县、市抽查检验(瓶)桶装水中铜绿假单胞菌不合格样品进行进一步检测，符合率达到100%。结论:该方法对铜绿假单胞菌携带毒力因子pcrL检测的灵敏度较高；且操作简便、特异性强，具有良好的实用性。
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单位湖南师范大学; 生命科学学院
