胍基化修饰结合稀土金属标记应用于蛋白质相对定量研究

作者：林虹君; 卫军营; 贾伟; 张养军; 钱小红; 蔡耘

来源：质谱学报, 2010, (05): 283-290.

• 稀土金属标签
• 胍基化修饰
• 蛋白质定量 rare earth metal-chelated tags
• guanylation
• protein quantification

稀土金属元素标记技术利用双功能试剂二乙三胺五乙酸双酸酐(DTPA双酸酐)将稀土金属元素和目标肽段连接起来作为质量标签,结合基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析实现蛋白质的相对定量研究。为进一步提高标记效率,本研究对反应体系温度、pH值、反应时间和金属标签过量倍数等进行优化,并结合胍基化修饰技术封闭蛋白质酶切肽段中的侧链ε-氨基,使标记反应只发生在末端氨基,提高标记选择性。标准蛋白质实验结果表明,所有酶切肽段胍基化反应效率均大于95%,且胍基化修饰反应对金属标记效率没有影响。对于选定的7个标准蛋白质而言,每个蛋白质都至少有3个肽段可以得到良好的标记结果。对于离子抑...

• 单位
  北京理工大学; 北京蛋白质组研究中心; 军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 生命学院; 蛋白质组学国家重点实验室