结核分枝杆菌黏附蛋白Rv0394c的结晶及其对分枝杆菌致病性的影响

作者：唐阳阳; 李华芳; 邵明珠; 藏鑫鑫; 崔子寅; 陈利苹; 党光辉; 刘思国^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (11): 16-134.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.11.0008

• 分枝杆菌
• 黏附蛋白
• Rv03914c
• 结晶
• 致病性
• 细胞黏附

为了研究结核分枝杆菌黏附蛋白Rv0394c的结构、黏附途径及其在分枝杆菌致病过程中的作用，试验通过亲和层析法纯化Rv0394c蛋白，然后使用蛋白结晶筛选试剂盒筛选蛋白质结晶条件，通过亚细胞定位确定Rv0394c蛋白在分枝杆菌中的定位；通过激光共聚焦显微镜观察Rv0394c蛋白与A549细胞的黏附情况；随后进行重组耻垢分枝杆菌(Rv0394c＿Ms和pMV262＿Ms)与A549细胞的黏附和黏附阻断试验并计数肺脏荷菌数；用重组耻垢分枝杆菌(Rv0394c＿Ms和pMV262＿Ms)滴鼻感染小鼠，在不同感染时间分别摘取肺脏观察病理变化并进行荷菌数计数。结果表明：成功获得Rv0394c蛋白。Rv0394c蛋白浓度为8 mg/mL时，在0.15 mol/L二水氯化钙-0.1 mol/L三水醋酸钠-pH值为4.6-15%异丙醇条件下，Rv0394c蛋白出现单晶生长。Rv0394c蛋白为胞外蛋白且能通过透明质酸(HA)黏附于A549细胞表面；与pMV262＿Ms相比，Rv0394c＿Ms黏附于A549细胞的数量极显著增加(P<0.01),用Rv0394c蛋白、HA和兔抗Rv0394c多克隆抗体处理的Rv0394c＿Ms在A549细胞中的荷菌数极显著高于Rv0394c＿Ms在A549细胞中的荷菌数(P<0.01)。在感染小鼠第4,8,14天，Rv0394c＿Ms组在肺脏中的荷菌数极显著高于pMV262＿Ms组(P<0.01);在第8天，Rv0394c＿Ms组荷菌数极显著高于Rv0394c＿Ms+HA组(P<0.01)。Rv0394c蛋白能诱导小鼠肺脏的病理损伤。说明黏附蛋白Rv0394c是通过透明质酸黏附于肺脏上皮细胞参与分枝杆菌致病过程的。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 吉林农业大学