重组猪胸膜肺炎放线杆菌NLPI蛋白诱导小鼠抗攻击感染的免疫保护力研究

作者：杨婷婷; 黄复深^*; 张雨龙; 张宇航; 李宏

来源：农业生物技术学报, 2018, 26(08): 1392-1400.

• 猪胸膜肺炎放线杆菌
• 重组NLPI蛋白(rNLPI)
• 免疫保护效果
• 小鼠

猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是猪(Sus scrofa)的一种呼吸道疾病,影响世界养猪业,其病原菌为猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP),现有疫苗由于保护效果不甚理想,因此有必要寻找新的疫苗候选分子。本研究检测了猪APP重组NLPI蛋白(recombinant NLPI,rNLPI)的免疫保护作用。根据Gen Bank中已报道的APP nlpi基因序列设计引物对,然后以APP的基因组为模板PCR扩增nlpi基因,测序后进行生物信息学分析,发现该基因(Gen Bank No.:MH027649)由900 bp组成,编码1个含299个氨基酸的蛋白质,为一外膜脂蛋白,此外膜蛋白在多种APP血清型之间具有很高同源性。将nlpi基因亚克隆至p ET32a(+)载体,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达APP rNLPI,并经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)和蛋白质印迹(Western blot,WB)确认。结果表明,在34 k D处有特异性条带,可被相应的阳性血清识别。动物保护实验采用BALB/c小鼠(Mus musculus)进行,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)用于测定免疫球蛋G(immunoglobulin G,IgG)抗体滴度。结果表明,弗氏不完全佐剂+50μg rNLPI、弗氏不完全佐剂+30μg rNLPI、弗氏不完全佐剂+10μg rNLPI、30μg rNLPI免疫后,可诱导小鼠分别产生40%、20%、10%和20%的存活率;佐剂组和生理盐水对照组存活率为0。幸存小鼠慢慢恢复健康,并正常采食。可见,rNLPI皮下免疫可诱导小鼠产生免疫应答和较高的抗攻击感染的免疫保护力。该研究结果为进一步筛选猪传染性胸膜肺炎分子疫苗积累了基础资料。

• 单位
  湖南农业大学