腺相关病毒载体血清型8递送的大鼠FVⅢ轻链对不同长度人FVⅢ重链活性的促进作用

作者：毛建华^*; 沈艳; 阮铮; 奚晓东^*

来源：中国实验血液学杂志, 2022, 30(06): 1817-1823.

DOI：10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2022.06.029

• 大鼠凝血因子VⅢ轻链
• 人凝血因子VⅢ重链
• 血友病A
• 腺相关病毒载体血清型8
• 凝血因子VⅢ活性

目的：研究大鼠FVⅢ轻链（rL C）对不同长度人FVⅢ重链（hHC,包括hHC745和hHC1690）活性的影响。方法：将hHC745、hHC1690、人FVⅢ轻链（hLC）和rL C分别克隆至含CB启动子的腺相关病毒血清型8(AAV8)表达载体中，采用HC和LC共表达的双链策略，转染293T细胞，收取转染后48 h的细胞培养上清；质粒经尾静脉高压注入血友病A(HA)小鼠，注射后48 h通过眼眶采血收集小鼠的外周血血浆。应用活化部分凝血活酶时间（aPTT）法检测FVⅢ的活性，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测FVⅢ的抗原表达量，计算比活性。结果：在293T细胞中，hHC745和hHC1690与rL C共表达时的FVⅢ活性显著高于与hLC共表达时的活性，分别提高到约4.6倍和2.9倍；ELISA结果表明hHC745和hHC1690与hLC和rL C共表达时的FVⅢ抗原表达无统计学差异；根据aPTT测得的FVⅢ活性与ELISA测得的FVⅢ抗原表达量计算的比活性结果显示，hHC745与rL C共表达时的比活性提高到与hLC共表达时的比活性的约4.1倍，而hHC1690与rL C共表达时的比活性提高到与hLC共表达时的约2.8倍。在高压注射的HA小鼠中，hHC745和hHC1690与rL C共表达时的FVⅢ活性显著高于与hLC共表达时的活性，活性分别提高到约5.1倍和2.1倍；ELISA结果同样显示，hHC745和hHC1690与hLC和rL C共表达时FVⅢ抗原表达无统计学差异；比活性结果表明，hHC745和hHC1690与rL C共表达时的比活性较与hLC共表达时的比活性显著提高，分别提高到约4.2倍和1.8倍；hHC1690与rL C共表达时的FVⅢ活性显著高于hHC745与rL C共表达时的活性。结论：rL C可以显著提高不同长度hF VⅢ重链（hHC745和hHC1690）的活性。

• 单位
  上海交通大学医学院附属瑞金医院; 医学基因组学国家重点实验室