TNF-α诱导大鼠软骨细胞焦亡模型的建立与评价

作者：徐靓; 吴玉娇; 袁晓阳; 张峰; 程刚; 张运芳; 魏伟^*; 严尚学^*

来源：安徽医科大学学报, 2022, 57(05): 781-786.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.05.020

• TNF-α
• 骨关节炎
• 软骨细胞
• 焦亡

目的 建立肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的大鼠软骨细胞焦亡模型并评价模型的特点。方法 两步酶消化法获取大鼠膝关节软骨细胞，倒置相差显微镜观察大鼠软骨细胞的形态结构，甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原(ColⅡ)免疫组化染色鉴定大鼠软骨细胞，用不同质量浓度TNF-α(5、10、20、40 ng/ml)诱导建立大鼠软骨细胞的焦亡模型，以TNF-α(0 ng/ml)为对照组。CCK-8法检测大鼠软骨细胞活力，Western blot检测大鼠软骨细胞焦亡信号相关蛋白，确定最佳刺激浓度，ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β、IL-18的水平，免疫荧光检测大鼠软骨细胞gasdermin D(GSDMD)表达，扫描电镜观测大鼠软骨细胞焦亡的形态学改变。结果 与对照组相比，大鼠软骨细胞的活力随着TNF-α浓度升高而逐渐下降，并且核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NLRP3)、半胱天冬酶1(caspase-1)、GSDMD、磷酸化核转录因子-κB p65(P-p65)蛋白的表达增加。TNF-α(20 ng/ml)可诱导大鼠软骨细胞基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达上调，ColⅡ表达减少，GSDMD荧光表达增强，培养上清液中IL-1β、IL-18水平增加，关节软骨细胞肿胀，显微结构破坏。结论 成功建立大鼠软骨细胞焦亡模型。TNF-α(20 ng/ml)体外可致大鼠软骨细胞肿胀死亡，显微结构破坏，软骨基质降解，焦亡信号活化。

• 单位
  安徽医科大学