慢病毒载体靶向沉默原代大鼠海马神经元黏着斑激酶表达siRNA的筛选

作者：张金平; 唐荣华; 吴军; 刘红星; 焦莉; 许峰; 康慧聪; 朱遂强; 薛峥

来源：华中科技大学学报(医学版), 2011, 40(01): 1-4+8.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2011.01.001

• 小干扰RNA
• 黏着斑激酶
• 海马神经元

目的制备针对黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的siRNA慢病毒载体,转染入原代培养的大鼠海马神经元细胞,筛选最佳的感染条件和沉默靶点序列。方法根据siRNA原理设计、构建、酶切、转化、PCR鉴定、阳性克隆测序并病毒包装3种靶向大鼠FAK的siRNA(T1,T2,T3),并转染至原代培养的大鼠海马神经元细胞,荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量PCR检测神经元细胞FAK基因表达,Western blot检测FAK蛋白表达。结果成功制备3种FAK siRNA慢病毒载体,并成功转染到神经元细胞中,在感染复数(MOI)为10并加入5μg/mL polybrene条件下转染率达到90%以上。T1、T2、T3均可抑制FAK基因及蛋白的表达,但T1沉默效果最好,敲除效率达到65%,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论筛选出最佳的转染条件及最佳沉默靶向性序列T1,为后续研究整合素在阿尔茨海默病发病中的机制奠定了实验基础。

• 单位
  神经内科; 华中科技大学同济医学院附属同济医院