慢病毒载体介导的人肝癌HepG2细胞BC047440基因沉默

作者：钟扬; 李靖; 黄小兵; 郑璐; 杨彤翰; 赵弘智; 梁平

来源：第三军医大学学报, 2010, (08): 744-748.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2010.08.028

• BC047440
• RNA干扰
• 慢病毒载体
• 人肝癌细胞系HepG2 BC047440
• RNAi
• lentivirus vector
• human hepatocellular liver carcinoma cell line(HepG2)

目的构建BC047440基因RNAi慢病毒干扰载体,并检测其对人肝癌细胞系HepG2细胞中BC047440基因的沉默效果。方法针对已经筛选确定的BC047440基因RNAi有效靶序列,合成BC047440基因特异性shRNA序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pFU-GW-iRNA载体连接产生pFU-GW-shBC047440慢病毒载体,PCR、DNA测序鉴定阳性克隆。用脂质体转染法将pFU-GW-shBC047440、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染293T细胞,产生具备感染能力的慢病毒。以293T细胞中绿色荧光蛋白的表达水平测定病毒滴度,并...

• 单位
  新桥医院