O-GlcNAcase抗原片段的选择、优化表达和多克隆抗体的制备

作者：林霖; 李国超; 李中华; 徐; 田高飞; 李静; 刘艳玲

来源：生物工程学报, 2011, (08): 1183-1190.

DOI：10.13345/j.cjb.2011.08.011

• O-GlcNAcase
• 表达
• 生物活性
• 多克隆抗体
• 亲和纯化 O-GlcNAcase
• expression
• biological activity
• polyclonal antibody
• affinity purification

为了探讨O-GlcNAc修饰的生物学作用和相关疾病的发病机理,需制备高效、专一的O-GlcNAcase(OGA)抗体。通过对人源OGA蛋白进行序列分析发现,氨基端1~350 aa片段(sOGA)抗原性和亲水性较强,将该片段构建至原核表达载体pET-28a,并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行诱导表达,通过优化IPTG浓度(0.05 mmol/L)和诱导时间(10 h)获得了高可溶性表达的重组蛋白酶。采用Ni-NTA亲和层析和分子筛层析对重组蛋白进行了纯化,SDS-PAGE检测分子量的大小(45 kDa)和纯度(95%以上)。以4-MU-O-GlcNAc为荧光底...

• 单位
  南开大学; 元素有机化学国家重点实验室; 莱芜职业技术学院