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摘要
为了评价牛疱疹病毒1型(BoHV-1)gG/TK双基因缺失株(BoHV-1 gG-/TK-)免疫保护效力,本研究以豚鼠作为该缺失株免疫效力评价模型,将16只豚鼠随机平均分4组,3组为免疫组,1组为对照组。免疫组分别肌肉注射106TCID50/只(低剂量组)、107TCID50/只(中剂量组)和108TCID50/只(高剂量组)Bo HV-1 g G-/TK-株,接种后21 d以相同剂量和方式加强免疫;对照组以相同方式接种DMEM培养基。免疫前及免疫后测定各组豚鼠直肠温度,观察临床症状,同时免疫后PCR检测排毒情况,进行安全性试验,结果显示,接种Bo HV-1 g G-/TK-株后各组豚鼠体温均正常,首免后5 d,中剂量和高剂量组豚鼠出现鼻腔分泌物,持续3 d,而低剂量组和对照组无明显临床症状;排毒检测结果显示,各实验组豚鼠免疫后均不排毒。一免后采集血清,分别利用g B抗体检测试剂盒和微量细胞中和试验检测各组豚鼠抗体水平,结果显示,该缺失株可诱导豚鼠产生g B抗体、中和抗体,这两种抗体水平分别在首免后7 d和21 d升高,持续时间分别为28 d和35 d,加强免疫后各免疫组豚鼠中和抗体急剧升高,首免后35 d高剂量组豚鼠中和抗体水平显著高于其他免疫组和对照组;同时利用试剂盒检测各组豚鼠血清中IFN-γ的表达水平,结果显示,首免后5 d免疫组豚鼠血清中IFN-γ含量达到峰值,持续时间为2 d;对以上数据分析显示,3个剂量免疫组豚鼠血清中抗体水平和IFN-γ含量与免疫剂量呈正相关,并显著高于对照组。首免后35 d 4组豚鼠均以107TCID50/只经鼻腔接种wt Bo HV-1强毒进行攻毒试验,试验结果显示,攻毒后4组豚鼠均体温正常,仅对照组分离到病毒;各组均有豚鼠出现鼻腔分泌物,高剂量组2只,持续1 d,另外两个剂量组各1只,均持续7 d,而对照组3只,最长持续11 d;肺组织的病理变化显示,高剂量组豚鼠肺组织几乎无病变,另外两个剂量组豚鼠肺脏有不同程度损伤,而对照组表现为肺泡结构消失,局部坏死和炎性细胞浸润等。综上所述,Bo HV-1 g G-/TK-株能诱导豚鼠体液免疫和细胞免疫,108TCID50/只以下的剂量为肌注安全剂量,当免疫剂量为108TCID50/只时能抵抗强毒株攻击,免疫效力最高,而106TCID50/只～107TCID50/只可产生部分保护效果。本研究为建立牛传染性鼻气管炎(IBR)疫苗的豚鼠评价模型奠定了基础,同时也为IBR基因工程疫苗的研制提供重要基础数据。
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单位农业微生物学国家重点实验室; 农业部; 华中农业大学
