科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的 探讨含有SAP结构域的肌肉增强因子2激活基因(MAMSTR)对肝细胞癌(HCC)预后的影响，以及对HCC细胞增殖和凋亡的作用和可能机制。方法 从TCGA数据库中获取369例HCC患者肿瘤组织和正常肝组织mRNA数据和相应临床信息。通过Wilcoxon检验分析MAMSTR基因在HCC组织和正常肝组织中的表达差异。通过Kaplan-Meier曲线和Cox回归模型分析MAMSTR与HCC患者预后的关系。应用基因功能富集分析(GSEA)检测MAMSTR在HCC中的潜在生物学功能。使用慢病毒包装质粒构建可诱导表达MAMSTR siRNA的HepG2肝癌细胞系。通过细胞计数、克隆形成和Caspase 3活性实验检测体外条件下MAMSTR对HCC细胞生长和凋亡的作用。使用蛋白质印迹、定量PCR实验分析MAMSTR影响HCC细胞凋亡的分子机制。通过转录因子分析MAMSTR对HCC生物学功能调控的可能信号通路。结果 与正常肝组织比较，MAMSTR基因在HCC组织中高表达，P<0.001;且其表达量与年龄和临床分期有关联，均P<0.05。生存分析显示，高表达MAMSTR组患者中位生存期较短，χ2=14.257,P<0.001。单因素(HR=1.302,95%CI为1.160～1.461)和多因素Cox回归模型(HR=1.265,95%CI为1.124～1.424)表明，MAMSTR可以作为HCC患者预后的独立危险因子，均P<0.001。单样本基因集富集分析(ssGSEA)分析发现，MAMSTR高表达组中CD56dim自然杀伤细胞(W=536,P=0.018)、效应记忆CD8+ T细胞(W=576,P=0.048)、嗜酸性粒细胞(W=305,P<0.001)、1型辅助性调节T细胞(W=497,P=0.006)和17型辅助性调节T细胞(W=439,P<0.001)抗肿瘤免疫细胞出现下调。同时，促肿瘤免疫细胞记忆B细胞(W=1 010,P=0.022)和2型辅助性调节T细胞(W=1 191,P<0.001)上调。GSEA结果显示，MAMSTR可能调控E2F转录因子[标准化富集分数(NES)=2.475,P<0.001]、PI3K/Akt/mTOR(NES=1.438,P=0.002)等信号通路。定量PCR检测发现，敲低组细胞MAMSTR的相对表达量(0.624±0.006)明显低于对照组(1.000±0.010),差异有统计学意义，t=45.998,P<0.001。生长计数和克隆形成实验发现，敲低MAMSTR表达可以抑制HepG2细胞生长，t=11.372,P=0.008。Caspase 3活性实验结果显示，Dox(+)组细胞中Caspase 3相对活性(2.209±0.027)明显高于Dox(-)组(1.000±0.017),差异有统计学意义，t=66.576,P<0.001。蛋白质印迹实验验证了在敲低MAMSTR表达的HepG2细胞中，PUMA蛋白在Dox(+)组(1.390±0.018)中相对于Dox(-)组(0.988±0.030)表达上调，差异有统计学意义，t=16.270,P=0.004;BCL2蛋白在Dox(+)组(0.565±0.005)相比Dox(-)组(1.046±0.038)表达下调，差异有统计学意义，t=17.635,P=0.003。定量PCR实验显示，BAX基因在Dox(+)组中相对表达量(1.415±0.055)明显高于Dox(-)组(1.000±0.020),差异有统计学意义，t=9.969,P=0.010。转录因子分析表明，MAMSTR可能通过E2F1参与调控细胞生长，相关E2F1蛋白转录结合域包括cisbp＿M3134、transfac＿pro＿M00920和transfac＿public＿M00516等。进一步分析发现，E2F1与MAMSTR表达呈正相关，r=0.566,P<0.001。结论 MAMSTR基因是促进HCC进展和导致HCC患者预后不良的可能因素之一，其可能通过调节E2F1转录因子网络进而调控HCC细胞增殖和凋亡。
- 单位
