非洲猪瘟病毒K145R蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

作者：耿笑林; 孙杰; 王彦伟; 黄甜; 刘鹏; 曹红梅; 逄文强; 郝丽影; 邓均华; 黄玉欣^*; 田克恭^*

来源：河南农业科学, 2021, 50(08): 154-159.

DOI：10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.08.018

• 非洲猪瘟病毒
• K145R蛋白
• 原核表达
• Western blot鉴定
• 单克隆抗体

为研发非洲猪瘟病毒(ASFV)的免疫诊断学试剂,利用大肠杆菌系统表达ASFV重组K145R蛋白,制备并鉴定K145R蛋白单克隆抗体。结果显示,成功构建pET28a-K145R表达载体,表达得到大小约为17 ku可溶性的重组K145R蛋白。Western blot分析证实,重组K145R蛋白与ASFV阳性血清有良好的反应性。经细胞融合、筛选,得到单克隆抗体1D4;ELISA检测其效价为1∶5 120 000;亚类鉴定其重链为IgG2a,轻链为κ;Western blot鉴定其能特异性识别重组K145R蛋白;IFA检测其能与ASFV反应。综上,实现K145R蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并制备单克隆抗体。

• 单位
  普莱柯生物工程股份有限公司