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摘要
目的】本研究旨在通过定向克隆菌株Nonomuraea candida HMC10T中一个新的Ⅱ型套索肽类生物合成基因簇，通过在放线菌底盘宿主中的异源表达，获得新结构套索肽noncaromin，并完成其抑菌活性分析。【方法】通过anti SMASH软件分析菌株N. candida HMC10T全基因组序列，确定新的Ⅱ型套索肽noncaromin的生物合成基因簇(biosynthetic gene cluster of noncaromin,nonc-BGC)。然后，利用ExoCET重组技术(exonuclease combined with RecET recombination)获得完整的nonc-BGC，得到重组质粒pJQK652，并通过λ-Red重组技术改造得到整合型质粒pJQK653。采用接合转移方法，将该质粒分别导入白色链霉菌、2株变铅青链霉菌、2株天蓝色链霉菌和红色糖多孢菌宿主中进行异源表达，再通过发酵和分离纯化获得目标套索肽noncaromin。最后，利用QTOF-ESI-MS2完成套索肽noncaromin的结构鉴定，并通过抗菌活性检测确定该化合物的生物活性。【结果】本研究利用ExoCET技术成功获得了完整的nonc-BGC，在6种放线菌宿主中成功异源表达，完成了noncaromin的结构鉴定，确定了其具有微弱的抗枯草芽孢杆菌活性。【结论】本研究在克隆得到新结构套索肽nonc-BGC的基础上，实现了该基因簇在6个放线菌底盘宿主中的成功表达，获得了1个具有微弱抑制枯草芽孢杆菌活性的新结构Ⅱ型套索肽noncaromin。本研究结果为发掘菌株N. candida HMC10T及其他放线菌中的新结构化合物提供了借鉴。
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