锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株的构建及鉴定

作者：赵倩; 陈玉霞; 王平; 任安经; 宋金超^*

来源：实用心脑肺血管病杂志, 2023, 31(06): 79-83.

• 锌指蛋白
• ZBTB20
• 血管平滑肌细胞
• 慢病毒感染

目的 构建并鉴定锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株。方法 本实验时间为2022-04-18至2022-11-29。设计合成针对ZBTB20基因的短发夹RNA(shRNA)，构建ZBTB20干扰慢病毒载体——pHBLVZBTB20 shRNA，包装ZBTB20干扰慢病毒。将人肺动脉平滑肌细胞（HPASMCs）接种于6 cm培养皿中，分别加入含8μg/ml polybrene和0.5 ml ZBTB20干扰慢病毒上清液的无血清培养液3 ml（实验组）和含8μg/ml polybrene和0.5 ml含无意义干扰序列的慢病毒的无血清培养液3 ml（阴性对照组）进行转染，48 h后加入嘌呤霉素（优化剂量为1.5μg/ml）以筛选转染成功的HPASMCs。采用荧光定量PCR检测两组ZBTB20 mRNA相对表达量，采用Western blot法检测两组ZBTB20，采用免疫组化试验检测两组ZBTB20表达情况，并进行细胞增殖实验和细胞迁移实验。结果 实验组ZBTB20mRNA相对表达量、ZBTB20均低于阴性对照组（P<0.05）。免疫组化试验结果显示，ZBTB20在阴性对照组的细胞核内高度表达，而在实验组的细胞核内无明显表达，表明ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株构建成功。感染后第2～5天，实验组细胞计数少于对照组，OD值低于阴性对照组（P<0.05）。感染后48 h，实验组划痕愈合面积百分比低于阴性对照组（P<0.05）。结论 本实验成功构建了锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株，且ZBTB20敲低后HPASMCs的增殖和迁移能力明显受到抑制。

• 单位
  基础医学院; 中国人民解放军第二军医大学; 上海理工大学