人CD81细胞外区大环原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达和纯化

作者：吕欣; 方海亮; 姚敏; 尹文; 雷迎峰; 杨敬; 康健

来源：医学研究生学报, 2008, (10): 1011-1013+1017.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2008.10.006

• CD81
• 载体构建
• 基因表达
• 包膜糖蛋白

目的:构建人CD81-LEL基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法:通过PCR扩增得到CD81-LEL基因编码区片段,与pMD18-T载体连接,经序列测定后,再将该扩增片段亚克隆入原核表达载体pET32a(+)中。酶切鉴定正确的表达载体pET32a-CD81-LEL转化表达菌BL21(DE3)进行诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行鉴定,用镍离子亲和层析法纯化融合蛋白。结果:成功构建了原核表达载体pET32a-CD81-LEL;SDS-PAGE显示目的蛋白大量表达且呈可溶性状态,Western-blot显示目的蛋白正确表达,并用镍离子亲和层析法获得纯化的重组蛋白。结论:CD81-LEL可以在大肠杆菌中表达,为进一步研究CD81与丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白E2的结合提供了有用的研究资料。

• 单位
  第四军医大学