一种适合蚊虫总RNA提取及样本保存的方法

作者：黄文雨; 卢莹; 尹灿灿; 马高风; 刘啸; 邵黄芳; 李梦楠; 孙恩涛^*

来源：应用昆虫学报, 2019, 56(06): 1430-1436.

• 蚊虫
• SDS法
• 改良SDS法
• RNA提取
• 样本保存

【目的】建立适合蚊虫总RNA提取的方法,探讨4种不同保存样本方法对蚊虫总RNA提取的影响。【方法】以室温、4℃冰箱、﹣20℃冰箱、﹣80℃冰箱4种不同方法保存蚊虫为研究对象,运用改良SDS法、传统SDS法和TRIzol法分别提取蚊虫总RNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR检测提取RNA的质量,并比较提取效果。【结果】改良SDS法、传统SDS法和TRIzol法提取蚊虫总RNA的浓度值分别为1.223 3±0.374 3、0.675 0±0.319 8、0.310 0±0.123 6,3种方法的浓度值差异具有统计学意义(F=14.767,P <0.001)。经LSD检验,改良SDS法提取蚊虫总RNA的浓度高于传统SDS法、TRIzol法(P=0.005、P <0.001);改良SDS法提取的蚊虫总RNA纯度较高,A260/A280、A260/A230分别在1.8-2.0及2.0-2.2之间;电泳检测结果表明28 s、18 s及5.8 s条带清晰完整,条带之间无弥散,且无苯酚、蛋白质和gDNA污染;β-actin扩增显示符合RT-PCR的实验要求。在一个月内,﹣20℃、﹣80℃冰箱保存的蚊虫样本,其总RNA的提取未见明显降解。【结论】改良SDS法是一种经济便利、可提取高质量蚊虫RNA的方法。﹣20℃、﹣80℃冰箱在一个月内对蚊虫样本具有较好的保存效果。

• 单位
  皖南医学院