自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响

作者：苗久旺; 荆雪宁; 高荧; 姜旭光; 房逢立; 张钦德

来源：中国实验方剂学杂志, 2018, 24(17): 167-171.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20181525

• 双去甲氧基姜黄素
• 3-甲基腺嘌呤
• 肝癌
• 细胞凋亡
• 线粒体膜电位

目的:探讨自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响。方法:以24 mg·L-1双去甲氧基姜黄素或联合5 mol·L-1自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对HepG2细胞作用24,48 h,以四甲基偶氮唑盐(methye thiazolye telrazlium,MTT)比色法检测细胞活力;以24 mg·L-1双去甲氧基姜黄素单用或联合3-MA对HepG2细胞作用48 h,Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡形态,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annxin V/propidium iodide,PI)双染检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色检测线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白Beclin-1,LC3,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的活性表达。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,使pro-Caspase-3,Bcl-2,LC3-Ⅰ蛋白表达降低(P<0.01),升高cleaved Caspase-3,Bax,Beclin-1,LC3-Ⅱ蛋白的表达(P<0.01);3-MA可增强双去甲氧基姜黄素所诱导的HepG2细胞凋亡,提高凋亡率(P<0.01),增加其降低线粒体膜电位作用(P<0.01),明显下调pro-Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达(P<0.01),并上调Beclin-1,LC3,cleaved Caspase-3蛋白的表达(P<0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可经线粒体机制诱导HepG2细胞凋亡,并诱导细胞自噬,自噬对凋亡有抑制作用。

• 单位
  山东中医药高等专科学校