芹菜素通过TLR4-TRAF6轴对肺纤维化大鼠的改善及对肺泡巨噬细胞自噬的作用研究

作者：白辉辉; 李彬^*; 张珊珊; 曹晶

来源：中药药理与临床, 2022, 38(06): 90-95.

DOI：10.13412/j.cnki.zyyl.20221010.001

• 芹菜素
• Toll样受体4
• 肿瘤坏死因子受体相关蛋白6
• 肺纤维化
• 肺泡巨噬细胞
• 自噬

目的:探讨芹菜素介导Toll样受体4(TLR4)-肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)轴对肺纤维化(Pulmonary fibrosis, PF)大鼠的改善及对肺泡巨噬细胞(AMs)自噬的影响。方法:SPF级健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、芹菜素0.02、0.04 g/kg组及地塞米松0.003 g/kg组。气管内滴注博莱霉素0.05 g/kg制备PF大鼠模型，次日给药，1次/d,连续给药14 d。HE染色评估肺组织炎症及病理变化；Masson染色检测肺组织胶原蛋白沉积以评估肺纤维化情况；免疫组化染色检测肺组织胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性表达；ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、IL-1β含量；比色分析法检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量；分离支气管肺泡灌洗液(BALF)中AMs并培养，透射电镜观察AMs自噬体形成情况；Western blot检测AMs中TLR4、髓样分化因子(MyD88)、TRAF6、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)、p-NF-κBp65、Beclin1、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、泛素样结合蛋白P62(P62)蛋白相对表达水平。结果:成功构建PF大鼠模型，与正常对照组比较，模型对照组大鼠肺组织病理显著损伤，见肺泡结构紊乱，肺泡壁增厚，炎性细胞广泛浸润；胶原纤维严重沉积，支气管及血管周围纤维化区域ColⅠ及肺间质、肺泡上皮α-SMA强阳性表达，血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量及肺组织中HYP含量升高，AMs中自噬体数量增加，TLR4、MyD88、TRAF6、Beclin1蛋白相对表达水平及p-P65/P65、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均升高，P62蛋白相对表达下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较，芹菜素各剂量组及地塞米松组大鼠肺组织病理损伤明显好转，胶原纤维沉积减少，肺组织中ColⅠ及α-SMA阳性表达减弱，血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量及肺组织中HYP含量降低，AMs中自噬体数量减少，TLR4、MyD88、TRAF6、Beclin1蛋白相对表达水平及p-p65/p65、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均降低，P62蛋白相对表达水平上调(P<0.05或P<0.01)。结论:芹菜素可改善PF大鼠肺组织结构病理损伤及纤维化症状，其作用机制可能与抑制TLR4-TRAF6轴激活，进而降低机体促炎因子水平并抑制AMs过度自噬有关。

• 单位
  河南医学高等专科学校; 河南中医药大学