重组新型冠状病毒疫苗(腺病毒载体)病毒颗粒数微滴式数字PCR方法的建立

作者：赵丹华; 彭沁桦; 李玉华; 吴小红^*

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2023, 43(11).

• 重组新型冠状病毒疫苗(腺病毒载体)
• 病毒颗粒数
• ddPCR
• 质量控制

目的构建一种重组新型冠状病毒疫苗(腺病毒载体)病毒颗粒数微滴式数字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)检测方法。方法以新型冠状病毒BA.1株基因组为靶基因, 选取刺突蛋白保守序列设计引物和探针, 建立重组新型冠状病毒疫苗病毒颗粒数ddPCR方法, 并进行线性、准确度、专属性、重复性和耐用性等方法学验证。结果 ddPCR的最佳退火温度是63℃, 病毒颗粒数为5×105～2×107 VP/ml时, 线性和回收率良好, 探针和引物特异性好, 重复性和中间精密度变异系数(coefficient of variation, CV)都在10%以内, 耐用性CV值在15%以内, 并且与qPCR结果相比, CV值都在10%以内。结论本研究建立的ddPCR方法灵敏度高、稳定性好、特异性强, 可用于重组新型冠状病毒疫苗(腺病毒载体)病毒颗粒数的定量检测。

• 单位
  中国食品药品检定研究院