重组腺病毒载体对大鼠胶质瘤细胞转染效率的影响

作者：高鹏; 张春; 赵巍; 沈冰

来源：宁夏医科大学学报, 2013, (12): 1322-1325+1332+1302.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2013.12.041

• 腺病毒
• 转染
• 大鼠胶质瘤细胞
• 转染复数

目的研究转染复数(MOI)和转染时间对重组腺病毒载体转染大鼠胶质瘤细胞转染效率的影响。方法体外培养大鼠胶质瘤细胞(C6细胞),用携带有rHSG基因的重组腺病毒载体(Adv-rHSG-GFP)转染C6细胞。根据MOI将细胞分为:A组MOI=0、B组MOI=10、C组MOI=50、D组MOI=80、E组MOI=100,转染Adv-rHSG-GFP 24h后分别收集每组细胞,采用Western Blot和免疫细胞化学法检测rHSG蛋白的表达,并通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜观察GFP阳性表达来评价重组腺病毒载体的转染效率。用MOI为100的Adv-rHSG-GFP转染C6细胞不同时间后(12、24、36和48h),同法收集细胞并检测rHSG蛋白的表达及评价重组腺病毒载体的转染效率。结果 Adv-rHSG-GFP转染C6细胞24h后,rHSG蛋白的相对表达量和绿色荧光蛋白表达随MOI值的增高而增多;用MOI为100的Adv-rHSG-GFP转染C6细胞后,12h即可观察到绿色荧光蛋白的表达,且在24h内随时间的变化而增高,在24~36h绿色荧光蛋白表达无变化,48h有所降低(P<0.01);rHSG蛋白相对表达量在12~48h内随时间的变化而增高,于48h达到最大值(P<0.01)。结论重组腺病毒载体能够有效转染C6细胞,且在MOI值为100,24h时有最高转染效率。

• 单位
  宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院