适用于结核分枝杆菌微测序耐药基因芯片的多重PCR体系的优化与评价

作者：孙照刚; 李自慧; 张洪静; 孙琦; 潘丽萍; 张宗德; 许绍发

来源：临床肺科杂志, 2020, 25(02): 163-166.

• 结核病
• 结核分枝杆菌
• 耐药
• 基因
• 多重PCR

目的优化结核分枝杆菌耐药相关基因多重PCR反应体系并评估其优缺点。方法利用改进的方法提取结核分枝杆菌基因组DNA,优化适合扩增rpoB,katG,mabA/inhA,pncA,embB,gyrA,rpsL,rrs和eis耐药基因片段的多重PCR体系,经测序确定所扩增出的基因片段,计算PCR操作过程所用的时间和材料成本等,分析多重PCR反应体系存在的优缺点。结果经过优化煺火温度、引物浓度以及添加NH4+和二甲基亚砜可以较好的扩增出5重和4重PCR产物,达到两管同时扩增9个结核分枝杆菌耐药相关基因的目的。利用该条件可以扩增出全部培养出的135株菌株DNA样本和80.56%的痰菌DNA样本,并且可以缩短PCR操作时间、降低试剂耗材成本,减少操作失误。结论优化的两管多重PCR法在同时扩增9个结核分枝杆菌耐药相关基因,具有明显的优势,具有良好的实用价值。

• 单位
  首都医科大学附属北京胸科医院