稳定长期沉默肾小管上皮细胞Megalin基因表达的载体构建

作者：詹林达; 黄锋先

来源：中国中西医结合肾病杂志, 2010, 11(06): 478-481+565.

DOI：10.3969/j.issn.1009-587X.2010.06.004

• RNAi
• Megalin
• 肾小管上皮细胞 RNAi Megalin Renal tubular epithelial cell

目的:为探讨沉默Megalin基因对肾小管上皮细胞Megalin蛋白诱导表达的抑制作用,构建长期下调Megalin蛋白表达的慢病毒载体作为研究工具。方法:分别用30,50,80,100nmol/LsiRNA或对照siRNA转染人HK-2细胞,48h后用免疫荧光和RT-PCR鉴定Megalin基因表达筛选有效的序列,用有效或对照组序列的正义链和反义链,中间加loop环,两端加入XhoⅠ和hindⅢ的酶切位点作为目的序列,经过XhoⅠ和HindⅢ双酶切的慢病毒载体质粒PLL3.7作为载体,将目的序列与载体连接,转化到XL-10Gold高感受态大肠杆菌中,XhoⅠ和HindⅢ双酶切初步鉴定,测序进一...

• 单位
  中山大学附属第一医院; 中山市人民医院