Wnt-1在全反式维甲酸促鼠胚神经干细胞向神经元分化中的作用

作者：钟德君; 康敏; 王清; 张德胜; 宋跃明

来源：中国修复重建外科杂志, 2009, 23(06): 742-746.

• 神经干细胞
• Wnt-1
• 分化
• 表达
• 鼠

目的探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)体外促神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化为神经元过程中Wnt-1表达的变化,及Wnt-1对NSCs分化的作用。方法取孕12～16dSD大鼠,分离和培养鼠胚NSCs。取第3代NSCs调整密度为1×106个/mL,分别用0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L浓度的ATRA干预,通过荧光双标染色技术和流式细胞仪检测各组细胞神经元分化率,确定1.0μmol/L浓度为ATRA促NSCs分化的最佳浓度。实验组用1.0μmol/L ATRA诱导体外培养第3代NSCs,培养3、5、7、9d后用免疫细胞化学染色、实时荧光定量PCR、Westernblot检测Wnt-1表达的变化;对照组不加ATRA培养。结果免疫细胞化学染色示对照组Wnt-1蛋白表达极少;实验组3d时表达最强,阳性细胞多;培养5d仍可见Wnt-1阳性表达;3、5d时积分吸光度(IA)值与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);7、9d Wnt-1阳性表达明显减少,IA值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。实时荧光定量PCR检测示对照组Wnt-1 mRNA相对表达量为0.0217±0.0721;实验组相对表达量随时间增加逐渐降低,3、5d时分别为0.5122±0.2800、0.2164±0.8870,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);7、9d分别为0.0385±0.2994、0.0355±0.3095,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Westernblot印迹检测可见特异染色条带,对照组Wnt-1蛋白表达量为0.0051±0.5583;实验组表达量随时间增加逐渐降低,3、5d时分别为0.4517±0.0713、0.3117±0.0805,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);7、9d分别为0.0073±0.0527、0.0047±0.9314,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在浓度为1.0μmol/L的ATRA诱导下,Wnt-1与NSCs的分化早期成正调控,可能与激活包括经典的Wnt信号途径等信号有关,表明Wnt-1与NSCs向神经元的分化有关。

• 单位
  四川大学华西医院; 泸州医学院附属医院