重组肺炎链球菌甘油脱氢酶活性及晶体培养的初步分析

作者：赵沙沙; 牛司强; 金丽; 杨伟; 汪德强

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2012, 28(10): 952-957.

• 肺炎链球菌
• 甘油脱氢酶
• 蛋白表达纯化
• 酶活性鉴定
• 蛋白质晶体培养

甘油脱氢酶能够氧化胞内甘油为代谢活动提供能量,并参与调控宿主粘附相关细菌蛋白质的表达,是潜在的抗菌药物靶点.本文利用大肠杆菌BL21原核表达肺炎链球菌甘油脱氢酶,获得大量上清表达的目的蛋白.再用Ni-NAT-Sepharose Fast Flow亲和层析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析以及Superdex 200分子筛进行纯化.经数据拟合,证实该酶在溶液中以同源二聚体形式存在.光谱实验证实,该重组表达甘油脱氢酶仍具有氧化甘油生成1,3-二羟基丙酮的活性.用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体,在0.1 mol/L Bicine pH 9.6,13%PEG MME 5000,0.2 mol/L KSCN,4%Dioxone条件下,得到了晶型好且有一定衍射能力的单晶,为解析肺炎链球菌甘油脱氢酶的三维结构及研究结构与酶活之间的关系奠定了基础.

• 单位
  重庆医科大学; 重庆医科大学附属第一医院