弓形虫Ⅰ/Ⅱ型ROP16蛋白对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和周期及增殖的影响

作者：刘春兰; 赵志军; 汪澎涛; 马慧慧; 李佳铭; 兰敏; 王艺璇; 于欣^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(11): 1465-1473.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0189

• 刚地弓形虫
• ROP16蛋白
• SH-SY5Y细胞
• 细胞凋亡
• 细胞周期
• 细胞增殖

为了探讨刚地弓形虫Ⅰ（RH）、Ⅱ（Me49）型ROP16蛋白对SH-SY5Y细胞凋亡、周期及增殖的影响，本研究通过表达Ⅰ、Ⅱ型ROP16蛋白（HBLV-ROP16Ⅰ、HBLV-ROP16Ⅱ）和空载（HBLV-NC）的慢病毒感染SH-SY5Y细胞以获得稳转株，实时荧光定量PCR (RT-PCR)和Western-blot验证SH-SY5Y细胞内ROP16过表达情况，流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期，CCK-8法检测细胞增殖情况，RT-PCR和Western-blot分别对凋亡相关因子（Bax、p53、Bcl-2、Caspase-9）及细胞周期相关因子（p21、CDK6）的mRNA和蛋白表达水平进行检测。结果显示，相比于空白组（Control）和空载体组（HBLV-NC），过表达组（HBLV-ROP16Ⅰ、HBLV-ROP16Ⅱ）细胞的ROP的16 mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P<0.05），说明稳转株构建成功；过表达组细胞的凋亡比率、G1期细胞比率均显著升高（P<0.05），而细胞增殖率显著降低（P<0.05），凋亡相关因子（Bax、p53、Caspase-9）及p21的mRNA及蛋白均高表达（P<0.05），而抗凋亡因子Bcl-2和促细胞周期G1/S转化因子CDK6的mRNA及蛋白均低表达（P<0.05）。相比于空白组，空载体组均无明显变化（P>0.05）。上述结果表明弓形虫Ⅰ、Ⅱ型ROP16蛋白可诱导SH-SY5Y细胞凋亡、细胞周期阻滞在G1期及抑制SH-SY5Y细胞增殖。

• 单位
  宁夏医科大学; 宁夏临床病原微生物重点实验室