miR-519d在结肠癌细胞系中的表达及对其增殖、凋亡和侵袭的影响

作者：杜天明; 严群; 王向阳; 王辉^*

来源：华中科技大学学报(医学版), 2022, 51(05): 612-617.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2022.05.005

• miR-519d
• 结肠癌
• 增殖
• 凋亡
• STAT3
• X连锁凋亡抑制蛋白

目的 观察miR-519d在结肠癌细胞系中的表达，及对结肠癌细胞系增殖、凋亡及侵袭的影响，并探索其机制。方法 通过实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测人正常结肠黏膜上皮细胞系NCM460和结肠癌细胞系HCT116、SW620、LOVO、HT29中miR-519d的表达差异。将结肠癌细胞系SW620分为3组，即miR-519d过表达组(miR-519d组)、阴性对照组(miR-NC组)及空白对照组(Blank组),采用LipofetamineTM 3000分别转染miR-519d mimics及阴性对照序列(Scramble),Blank组仅给予空白对照。采用MTT法测定细胞增殖能力，采用PI/AnnexinⅤ-FITC双染和流式细胞术测定细胞凋亡能力，采用Transwell法测定细胞侵袭能力。蛋白印迹法测定信号转导及转录激活因子3(STAT3)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达变化。结果 结肠癌细胞系HCT116、SW620、LOVO和HT29的miR-519d相对表达量均低于正常结肠黏膜上皮细胞系NCM460(均P<0.05)。转染24 h后，miR-519d组miR-519d相对表达量高于miR-NC组(t=43.060,P<0.01),Blank组与miR-NC组差异无统计学意义。MTT实验显示，细胞铺板72 h及96 h时miR-519d组细胞增殖能力明显低于miR-NC组(均P<0.05),Blank组与miR-NC组差异无统计学意义。miR-519d组细胞凋亡率高于miR-NC组[(23.65±1.23)%vs.(4.96±0.63)%,P=0.002],miR-NC组与Blank组细胞凋亡率差异无统计学意义。miR-519d组侵袭细胞数少于miR-NC组[(55±8)vs.(137±14),P=0.003],Blank组与miR-NC组侵袭细胞数差异无统计学意义。miR-519d组XIAP蛋白相对表达量低于miR-NC组[(0.32±0.04)vs.(1.0±0.05),P<0.01],Blank组与miR-NC组XIAP蛋白表达量差异无统计学意义。miR-519d组STAT3蛋白相对表达量低于miR-NC组[(0.44±0.04)vs.(1.05±0.07),P<0.01],Blank组与miR-NC组STAT3蛋白表达量差异无统计学意义。结论 miR-519d过表达可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭，并促进其凋亡，其作用机制可能与STAT3和XIAP蛋白表达下调有关。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 华中科技大学; 同济医学院附属武汉中心医院