氯喹对骨髓单核细胞向破骨细胞分化的抑制作用及其机制

作者：林立营; 张文; 史要鹏; 姜梅荣; 张冬燕^*

来源：山东医药, 2022, 62(20): 35-40.

• 破骨细胞
• 骨髓单核细胞
• 细胞分化
• 氯喹
• T细胞活化核因子1
• T细胞免疫调节因子1
• IP3受体2

目的 观察氯喹对骨髓单核细胞（BMMs）向破骨细胞分化的抑制作用，并基于T细胞免疫调节因子1(TCIRG1)基因调控探讨相关机制。方法 获取小鼠BMMs，分为对照组、氯喹1组、氯喹2组，分别加入0、5、10μmol/L的氯喹，用核因子κB受体激活因子配体和巨噬细胞集落刺激因子刺激BMMs分化；采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察破骨细胞分化情况，RT-PCR法检测破骨细胞分化相关基因TCIRG1、T细胞活化核因子1(NFATc1)、Dc-stamp、MMP9、Oscar、IP3受体（IP3R）1、IP3R2、IP3R3 mRNA,Western blotting法检测TCIRG1、NFATc1、IP3R蛋白，免疫组化法观察NFATc1的亚细胞定位，流式细胞术检测溶酶体酸化情况，RT-PCR法检测空泡型质子泵相关亚基ATP6 V0d2、ATP6 V1c1mRNA。将BMMs分为A、B、C、D组，A组转染过表达TCIRG1的腺病毒并以10μmol/L氯喹刺激，B组转染空病毒并以10μmol/L氯喹刺激，C组仅给予10μmol/L氯喹，D组不转染也不添加氯喹；采用Western blotting法检测细胞中的TCIRG1、NFATc1、IP3R2蛋白，RT-PCR法检测TCIRG1、NFATc1、IP3R1、IP3R2、IP3R3 mRNA。结果 氯喹2组TRAP阳性细胞体积小于氯喹1组；氯喹1组和氯喹2组细胞中NFATc1、Oscar、IP3R1、IP3R2、IP3R3 mRNA相对表达量低于对照组，氯喹2组Dc-stamp、MMP9 mRNA表达低于对照组（P均<0.05）；对照组、氯喹1组、氯喹2组细胞中TCIRG1、NFATc1、IP3R2蛋白表达依次降低（P均<0.05），氯喹2组细胞核中NFATc1表达减少；氯喹1组、氯喹2组相较对照组溶酶体酸度降低；对照组、氯喹1组、氯喹2组TCIRG1、ATP6V0d2、ATP6 V1c1mRNA相对表达量依次降低（P均<0.05）。与B、C组相比，A组出现了一些体积较大的TRAP阳性细胞，但是数量和体积未超过D组；A组NFATc1、IP3R2 mRNA及蛋白表达高于B、C组，但低于D组（P均<0.05）。结论 氯喹对BMMs向破骨细胞分化有抑制作用，TCIRG1过表达可部分逆转氯喹对分化的抑制作用；氯喹的作用机制可能与调控TCIRG1、IP3R、NFATc1表达有关。

• 单位
  聊城市人民医院