等位基因特异扩增实时定量PCR检测新生儿高胆红素血症相关基因A388G多态性

作者：张萍; 张智慧; 滕光英^*; 陈进; 卓庆翠

来源：中华实用儿科临床杂志, 2017, 32(14): 1094-1096.

• 等位基因特异扩增实时定量聚合酶链反应
• SLCO1B1基因
• A388G多态性位点
• 高胆红素血症

目的建立检测高胆红素血症相关基因SLCO1B1 A388G多态性位点的等位基因特异扩增实时定量PCR(allele-specific real-time PCR,ASPCR)方法,用于临床样本的检测和分析。方法针对SLCO1B1基因A388G多态性位点设计引物,建立检测方法。构建野生型和突变型质粒标准品,并选取50例临床样本,其中已确诊并存在SLCO1B1基因A388G突变的新生儿高胆血红素症病例30例,不存在SLCO1B1基因A388G突变的健康新生儿20例,使用特异性引物和非特异性引物分别检测野生型质粒、突变型质粒和临床样本,根据二者Ct(cycle threshold)值判断是否存在A388G多态性位点。评价方法的准确性、灵敏度和特异性。结果特异性和非特异性引物扩增等量野生型模板的Ct值之差(△Ct)可达13.97±0.75,ASPCR法能正确区分野生型和突变型质粒,Probit回归分析显示其灵敏度可以达到5.28拷贝/μL。临床样本存在A388G突变的Ct值均远小于37.75,为阳性结果;不存在A388G突变的未见任何扩增或Ct值大于37.75,可判为阴性。结论 ASPCR是一种快速、简便、有效的检测临床样本SLCO1B1基因A388G多态性位点的方法,可用于大样本筛查新生儿高胆红素血症基因位点。

• 单位
  齐鲁医院; 第一临床医学院; 南昌大学