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摘要
目的克隆宁夏枸杞类黄酮/异黄酮生物合成途径中的关键酶查耳酮合成酶(CHS,EC2.3.1.74)。方法以宁夏枸杞为材料,利用同源克隆和RT-PCR技术得到1条CHS基因,并对其进行生物信息学分析。结果该家族的cDNA片段长为1 148 bp,编码382个氨基酸,蛋白相对分子质量为4.168×104,等电点为6.22。氨基酸序列和结构分析显示CHS基因家族有一个活性位点,即查耳酮和二苯乙烯合成酶活性位点。宁夏枸杞CHS(LyCHS)蛋白很可能定位在细胞质。对二级结构和三级结构进行预测,发现LyCHS蛋白中无规则卷曲126个,α螺旋和β折叠分别为166和25个,延伸链65个。系统进化分析表明,LyCHS基因与马铃薯野生种、马铃薯、番茄具有很高的同源性。该基因已在GenBank上注册,基因序列登录号为JQ964237。结论首次克隆了LyCHS基因片段,为研究其表达特性以及功能提供了基础。
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