稳定表达人α-分泌酶adam10基因启动子荧光素酶报告基因细胞系的构建研究

作者：唐颖; 胡小童; 朱炳林; 韩宇

来源：重庆医学, 2017, 46(28): 3947-3952.

• 去整合素和金属蛋白酶10
• 启动子
• 荧光素酶报告载体
• 高通量药物筛选

目的构建携带adam10基因启动子的荧光素酶报告载体,筛选稳定表达细胞系并分析其活性。方法提取人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)基因组DNA,以其为模板,PCR扩增adam10基因启动子并克隆至荧光素酶报告载体pGL4.17中,构建adam10基因启动子荧光素酶报告载体pGL4.17-adam10,将其转染SH-SY5Y细胞(无启动子的pGL4.17载体作阴性对照,带有CMV启动子的pGL4.51载体作阳性对照),经G418进行稳定表达株的筛选,用1μmol/L维甲酸处理细胞4d后检测其荧光活性。结果成功扩增到438bp的adam10基因启动子,pGL4.17-adam10经PCR和双酶切鉴定均正确。SH-SY5Y细胞被该载体转染后经G418筛选得到稳定表达adam10基因启动子的细胞株,经检测具有较强的转录活性;1μmol/L维甲酸能诱导adam10基因启动子高效表达。结论成功构建了人adam10基因启动子荧光素酶报告载体,adam10基因启动子在SH-SY5Y细胞中能稳定表达,为深入研究adam10基因的表达调控、多态性分析及其高通量药物筛选提供基础。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 神经内科