稳定沉默动粒蛋白-H表达的人乳腺癌细胞株的构建

作者：谢闺娥; 汤红平; 刘岩丽; 陈劲松; 汤雪薇; 吴韶清; 吴洁莹; 李焱; 廖灿

来源：肿瘤研究与临床, 2014, 26(10): 654-657.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2014.10.002

• 乳腺肿瘤
• 动粒蛋白-H
• RNA干扰

目的构建人动粒蛋白-H(CENP-H)shRNA反转录病毒表达载体,获得稳定转染的人乳腺癌细胞株。方法合成CENP-H基因干扰序列,定向插入反转录病毒表达载体pSUPE-Rretro-puro质粒并测序鉴定;干扰质粒经磷酸钙介导转染293FT细胞制备反转录病毒;对人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞进行反转录病毒感染,嘌呤霉素筛选获得稳定转染的细胞株。Real-time PCR和Westem blot分别检测稳定转染细胞株的CENP-H mRNA和蛋白的表达。结果成功构建和筛选出靶向CENP-H基因的两对shRNA质粒表达载体。稳定转染细胞CENP-H mRNA表达显著下调,CENP-H的蛋白表达水平明显低于对照。结论稳定沉默CENP-H表达的人乳腺癌细胞株的建立,为以CENP-H基因为靶点的人乳腺癌基因研究提供了实验基础。

• 单位
  广州医科大学; 深圳市妇幼保健院; 南方医科大学; 广州市妇女儿童医疗中心