口蹄疫病毒O型和A型交互反应性单克隆抗体的筛选与鉴定

作者：周莎莎; 李坤; 王省; 曹轶梅; 包慧芳; 孙普; 李冬; 李平花; 白兴文; 付元芳; 张婧; 马雪青; 陈应理; 刘在新; 卢曾军^*

来源：中国兽医科学, 2020, 50(04): 403-411.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0069

• 口蹄疫病毒
• 抗原结构
• 单个B细胞抗体技术
• 单克隆工程抗体
• 交互反应性

不同血清型口蹄疫病毒(FMDV)之间不能产生交叉免疫保护,但是血清学的交叉反应确实存在。本研究旨在建立一种筛选型间交互反应性抗体的方法,以期为解析FMDV血清型间保守的抗原结构奠定基础。本方法主要依据单个B细胞抗体技术,首先采用两种不同的荧光染料FluoProbes 647H和Pacific Blue分别标记O型与A型FMDV 146S灭活抗原,然后利用流式细胞分选技术,从免疫牛外周血单个核细胞(PBMCs)中分选出结合两种抗原的特异性B细胞,通过单个B细胞抗体基因测定,获得Ig G抗体重链与轻链可变区编码序列,并将可变区基因插入含有牛IgG抗体恒定区的pcDNA3.4载体中,构建IgG抗体的重链与轻链表达质粒。将重链与轻链表达质粒共转染中国仓鼠卵巢悬浮细胞(CHO-S)进行完整抗体表达。结果显示,通过该方法获得了5株FMDV特异性单克隆抗体,其中4株(H64、R82、I16、R29)经间接免疫荧光(IFA)检测都可特异性识别O和A型FMDV;ELISA结果显示,H64、R82、I16与O、A型抗原均具有较好的亲合力;Western-blot结果显示,I16可特异性结合O、A型FMDV结构蛋白VP2中的线性表位,说明在衣壳蛋白VP2上存在血清型间保守的抗原表位,通过本研究进一步加深了对FMDV抗原结构的认识。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所