成人真皮成纤维细胞原代培养及鉴定

作者：尚颖; 赵丽丽; 席雯; 温广东; 高占成^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2022, 34(09): 824-828.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008674

• 真皮成纤维细胞
• 原代培养
• 细胞鉴定

目的探讨建立成人真皮成纤维细胞原代培养方法。方法新鲜皮肤组织用分散酶Ⅱ(dispaseⅡ)消化,分离上皮和真皮层,分别采用组织块法和Ⅰ型胶原蛋白酶消化法分离真皮层成纤维细胞。用倒置相差显微镜观察细胞生长情况,波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞类型及纯度;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性绘制生长曲线,流式细胞术检测细胞周期分布。结果培养48 h,经胶原蛋白酶分离得到的成纤维细胞95%以上贴壁,同时细胞开始从组织块边缘贴壁延伸生长。培养5 d时,组织块周围有大量细胞贴壁增殖。细胞生长迅速,第7天,增殖细胞层铺满培养皿。组织块法分离的成纤维细胞中可混杂少量上皮细胞团,而胶原蛋白酶消化法分离的细胞波形蛋白阳性率接近100%,几乎均为成纤维细胞。结论胶原蛋白酶消化和组织块法均是快速、经济、有效获取真皮成纤维细胞的方法。胶原蛋白酶消化法可以更有效避免上皮细胞污染,分离的真皮成纤维细胞有较好的增殖能力。

• 单位
  北京大学人民医院