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摘要
以成年健康简州大耳羊为实验动物，利用RT-PCR技术克隆山羊ZNF32基因。利用生物信息学方法对其进行表达特性分析，并利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术检测ZNF32在山羊各组织中和诱导分化不同阶段的皮下脂肪细胞中的表达水平。同时构建过表达载体并利用qPCR技术检测过表达或干扰ZNF32对增殖抑制相关基因表达的影响，探究其对山羊皮下前体脂肪细胞增殖的作用。结果显示，克隆所得山羊ZNF32核苷酸序列长度为1 049 bp，其中CDS区长为822bp，编码273个氨基酸；ZNF32分子量为30 983.03 Da，理论等电点为9.52，亲水性平均值为-0.813；在氨基酸序列组成中，丝氨酸含量为9.2%，占比最高；蛋白质二级结构预测显示，149个氨基酸形成无规卷曲，含量最高；氨基酸同源性比对结果显示，简州大耳羊与绵羊氨基酸序列相似性最高且在进化上亲缘关系最近；组织表达谱表明，ZNF32基因在山羊各个组织中广泛表达，其中在大肠中表达量最高（P<0.01）；时序表达谱表明，ZNF32基因表达水平呈上升趋势，在96 h表达量达到最高，极显著高于分化前（P<0.01）;qPCR技术检测结果表明，过表达ZNF32基因抑制增殖抑制相关基因p27和p57的表达，干扰ZNF32基因促进p21、p27、p53及p57的表达。以上结果表明，ZNF32基因可能是山羊皮下脂肪细胞分化和增殖的正调控因子。
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