小鼠BPI36-259抗菌蛋白在原核细胞中的表达及其抗血清的制备

作者：冯颖; 李丽; 龙军; 范宜强; 刘振龙; 孔庆利; 吕喆; 王炜; 安云庆

来源：首都医科大学学报, 2008, 29(2): 184-189.

DOI：10.3969/j.issn.1006-7795.2008.02.020

• 小鼠BPI36-259目的蛋白
• E.coli BL21(DE3)
• 多克隆抗血清

目的 采用原核表达系统获得小鼠BPI36 259目的 抗菌蛋白,免疫家兔制备目的 蛋白特异性抗血清.方法 利用生物信息学方法预测小鼠BPI功能片段,构建pUC57 muBPI1 281质粒;PCR扩增获得muBPI36 259基因片段,构建pET28a muBPI36 259重组质粒;用IPTG诱导重组质粒转化的E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得以包涵体形式表达为主的muBPI36 259目的 蛋白;用变性目的 蛋白免疫家兔获得兔抗鼠BPI36 259蛋白特异性抗血清;用间接ELISA法检测血清抗体特异性及其效价.结果 成功构建了pET28a muBPI36 259重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)获得以包涵体表达形式为主的目的 蛋白;用变性目的 蛋白免疫家兔获得小鼠BPI36 259蛋白特异性抗血清(效价1∶ 10 000).结论 在原核细胞中成功获得了以包涵体表达形式为主的抗菌蛋白,免疫家兔获得的特异性抗血清可用于小鼠BPI36 259目的 抗菌蛋白的检测.

• 单位
  基础医学院; 首都医科大学