重组肝细胞生长因子质粒的构建及其在成骨细胞中的表达

作者：党洪胜; 李伟; 沈彬; 杨静; 周宗科; 裴福兴; 鲁芳; 彭文珍

来源：四川大学学报（医学版）, 2007, 38(06): 929-933.

DOI：10.3969/j.issn.1672-173X.2007.06.004

• 肝细胞生长因子
• 成骨细胞
• 基因转染

目的构建人肝细胞生长因子(hHGF)真核表达质粒,探讨重组质粒对体外培养胎兔成骨细胞增殖分化的影响,为转基因治疗骨科疾病提供实验基础。方法RT-PCR扩增人肝脏中hHGF全长cDNA片段,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,用脂质体法将pcDNA3.1(+)-hHGF质粒转染成骨细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,用免疫荧光染色检测hHGF基因在成骨细胞内的表达;MTT法和FCM检测pcDNA3.1(+)-hHGF转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;采用RT-PCR和ELISA方法检测hHGF在成骨细胞中的表达。NPP法检测碱性磷酸酶合成情况。结果成功构建hHGF真核表达质粒,免疫组化和RT-PCR检测显示转染成骨细胞后细胞内hHGFmRNA呈现高水平表达;MTT法和FCM检测显示重组质粒转染后能促进成骨细胞的增殖,S期细胞比例增多;ELISA法检测到hHGF在细胞中有分泌性表达。转染重组质粒的成骨细胞合成碱性磷酸酶能力显著提高。结论成骨细胞经基因转染后可以表达hHGF,外源性hHGF基因能够刺激成骨细胞增殖、分化及成骨活性。

• 单位
  四川大学; 郧阳医学院; 四川大学华西医院; 四川省人民医院