阿苯达唑载药囊泡对细粒棘球蚴原头节活性的影响

作者：乔世源; 周雪; 刘程豪; 姜慧娇; 卜媛媛; 陈雪玲; 吴向未^*

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(03): 324-336.

• 细粒棘球蚴
• 阿苯达唑
• 载药囊泡

目的 探讨装载阿苯达唑的细胞外囊泡体外对细粒棘球蚴原头节活性的影响。方法 将H22小鼠肝癌细胞分为低、中、高浓度组，分别加入终浓度为200、 400、 600μmol/L的阿苯达唑，紫外线（UVB, 300 J/m2）照射1 h，孵育18～20 h，然后通过超高速差速离心法制备阿苯达唑载药囊泡；以同样方法制备未加阿苯达唑的空载囊泡。用透射电镜观察载药囊泡的形态、激光粒度仪测量粒径、液相色谱仪检测载药囊泡的最佳载药量。将体外培养的细粒棘球蚴原头节随机分为4组，分别加入培养基（空白对照组）、空载囊泡（空载囊泡组）、载药囊泡（载药囊泡组）、阿苯达唑（阿苯达唑阳性对照组），其中载药囊泡组和阿苯达唑阳性对照组的阿苯达唑终浓度为13μmol/L。共培养第1、 3、 5、 7天取原头节进行伊红染色，观察原头节形态与活力，计算各组的存活率；共培养第3、 5、 7天取原头节，用半胱天冬氨酸蛋白酶-3 (caspase-3)检测试剂盒检测原头节caspase-3的表达量，观察原头节凋亡情况。组间比较使用单因素方差分析。结果透射电镜观察结果显示，载药囊泡形态呈大小不一的小囊泡，具有双层膜结构；粒径为200～400 nm。液相色谱检测结果显示，低、中、高浓度组载药囊泡的阿苯达唑有效药物浓度分别为（36.3±2.85）、（79.0±2.30）、（99.5±4.20）μmol/L。有效药物浓度的的提高幅度，中浓度组较低浓度组高于高浓度组较中浓度组，差异有统计学意义（F=21.43, P <0.05），制备载药囊泡的最适加药浓度为400μmol/L。伊红染色后镜下观察结果显示，共培养第7天，空白对照组及空载囊泡组的原头节活性良好，形态、结构清晰；阿苯达唑阳性对照组原头节活性减弱，结构欠清晰，体积缩小；载药囊泡组原头节结构紊乱、皱缩、死亡；共培养第7天，空白对照组、空载囊泡组、阿苯达唑阳性对照组、载药囊泡组原头节存活率分别为（91.2±1.07）%、（88.9±1.43）%、（64.5±1.19）%、（45.3±0.98）%，载药囊泡组原头节存活率均低于其他各组，差异有统计学意义（F=1 021.17, P <0.05）。原头节凋亡检测结果显示，共培养第3天，空白对照组、空载囊泡组、阿苯达唑阳性对照组和载药囊泡组caspase-3的表达量分别为（41.80±3.02)、（40.26±2.78)、（55.20±3.09）和（68.15±3.60）μmol/L；第5天分别为（43.18±2.43）、（43.02±3.13）、（52.17±4.13）和（62.74±3.16）μmol/L，第7天分别为（52.93±1.46)、（53.08±1.60）、（57.32±1.81）和（61.99±1.14）μmol/L；第3、 5、 7天，各组间差异均有统计学意义（F=51.97、 24.53、 23.82, P <0.05），载药囊泡组caspase-3的表达量均高于阿苯达唑阳性对照组（F=22.36、 12.43、 14.33, P <0.05）。结论 载药囊泡可提高阿苯达唑的溶解度，增强阿苯达唑对细粒棘球蚴原头节的杀伤效果。

• 单位
  石河子大学; 石河子大学医学院第一附属医院