土霉素完全抗原的制备及ELISA检测方法的建立

作者：曹金博; 胡骁飞; 王耀; 李燕虹; 曹夕丹; 邢云瑞; 孙亚宁; 邓瑞广; 张改平^*

来源：食品与机械, 2019, 35(09): 77-83.

DOI：10.13652/j.issn.1003-5788.2019.09.015

• 土霉素
• 完全抗原
• 多抗血清
• ELISA

为制备土霉素(Oxytetracycline,OTC)完全抗原,获得免疫学特性良好的土霉素鼠源多抗血清并建立OTC免疫学检测方法,采用重氮化法在OTC分子上引入羧基,进而利用改进碳二亚胺法将其与载体蛋白偶联制备完全抗原,通过红外扫描、紫外扫描和凝胶电泳鉴定其偶联效果,然后将完全抗原免疫BLAB/c小鼠获得多抗血清(pAb)并对其免疫学特性进行鉴定,通过优化条件建立OTC间接竞争ELISA检测方法。结果表明,偶联效果良好,免疫的4只小鼠多抗血清效价均达到1∶12 800;4只小鼠多抗血清均有抑制效果,其中2号小鼠产生的多抗血清效果最佳,基于该多抗血清建立的OTC间接竞争ELISA检测方法半数抑制浓度(IC50)为32.92ng/mL,检测限(LOD)为1.3ng/mL,牛奶样品中添加回收率在84.70%～87.45%,与金霉素、四环素的交叉反应率分别为5.27%,4.10%,与其他竞争物交叉反应率<0.4%。该试验成功合成了OTC完全抗原,获得了免疫学特性良好的OTC多抗血清,并建立了OTC免疫学检测方法。

• 单位
  食品与生物工程学院; 河南农业大学; 河南科技大学; 河南省农业科学院