脂联素通过AMPK/mTOR通路抑制H_2O_2诱导的大鼠髓核细胞凋亡及细胞外基质退变

作者：王振; 胡峻铮; 范卫民

来源：南京医科大学学报(自然科学版), 2018, 38(07): 928-933+961.

• 脂联素
• 髓核细胞
• 凋亡
• 细胞外基质退变
• AMPK/mTOR通路

目的:探讨脂联素(adiponectin,APN)对氧化应激下大鼠髓核细胞凋亡和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)退变的保护作用及相关机制。方法:原代培养SD大鼠髓核细胞,CCK-8法检测细胞活力,以确定APN的最适保护浓度。将细胞分为对照组、H_2O_2组、APN+H_2O_2组及Compound C+APN+H_2O_2组,流式细胞术检测凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)及带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-5(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs-5,ADAMTS-5)等蛋白的表达,RT-PCR检测Ⅱ型胶原(collagen typeⅡalpha 1 chain,COL2A1)、蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)的m RNA水平,Western blot评估5′-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)的磷酸化水平。结果:1μg/m L APN对200μmol/L H_2O_2所致的细胞毒性起最佳拮抗作用。APN预处理显著抑制H_2O_2诱导的髓核细胞凋亡。相应地,Bax/Bcl-2比值及Cleaved Caspase-3表达的增加也被APN抑制。尽管对ADAMTS-5无明显抑制作用,APN降低了H_2O_2诱导的MMP-13的表达。此外,H_2O_2对COL2A1及ACAN转录的抑制作用也被APN显著缓解。APN还促进AMPK磷酸化并抑制m TOR磷酸化,而AMPK抑制剂Compound C显著减轻了APN对m TOR磷酸化的抑制作用。APN对凋亡、分解代谢的抑制作用及其对合成代谢的促进作用也均被Compound C逆转。结论:APN通过AMPK/m TOR通路抑制H_2O_2诱导的大鼠髓核细胞凋亡及ECM退变。

• 单位
  南京医科大学第一附属医院; 东南大学附属中大医院