表达双功能融合蛋白(sCAR-EGF)腺病毒载体的构建及其活性检测

作者：任鹏康; 王丰; 李惠明; 李宗海; 黄倩

来源：生物工程学报, 2006, 22(05): 713-719.

DOI：10.3321/j.issn:1000-3061.2006.05.004

• 腺病毒
• 表皮生长因子受体
• 基因治疗
• 柯萨奇病毒-腺病毒受体

为了提高腺病毒载体用于基因治疗的靶向性,采用PCR和体外连接的方法构建了柯萨奇病毒-腺病毒受体(Coxsackievirus-AdenovirusReceptor)胞外段sCAR和表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)EGF融合基因,然后将此融合基因插入穿梭质粒pDC315。利用Ad-MAX腺病毒系统,将重组质粒pDC315-sCAR-EGF与腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE13cre共同转染AD-293细胞,成功包装出一种复制缺陷型腺病毒Ad5-CMV-sCAR-EGF。经PCR鉴定该病毒含有sCAR-EGF融合基因片段,Westernblotting证实该病毒能表达sCAR-EGF融合蛋白。体外试验证实该病毒感染细胞所产生的融合蛋白能够引导携带报告基因的腺病毒Ad5-CMV-luc高水平感染肿瘤细胞,为高水平表达EGFR的肿瘤的靶向性基因治疗提供了新的手段。

• 单位
  上海交通大学; 上海市第一人民医院; 中心实验室