猪圆环病毒2型Cap基因多拷贝质粒的构建及病毒样颗粒的表达

作者：尹曼曼; 刘汉平; 楼觉人^*

来源：动物医学进展, 2019, 40(09): 1-6.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.09.001

• 猪圆环病毒2型
• Cap蛋白
• 多拷贝数
• 毕赤酵母
• 病毒样颗粒

通过构建多拷贝数表达质粒,获得高表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白Cap的毕赤酵母菌株。将Cap的基因克隆到pPIC3.5K载体中后,利用同尾酶技术将表达盒(5′AOX-Cap-TT)重复插入载体,分别构建了含有1、2、4、6个拷贝基因数的表达质粒并通过电转化导入KM71菌株,重组菌株经发酵和甲醇诱导,通过SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达;绘制不同拷贝数重组菌株的生长曲线;表达产物经纯化后透射电镜观察是否组装形成病毒样颗粒(VLPs)并免疫小鼠评估其免疫原性。Western blot结果显示,Cap蛋白能够在酵母细胞内表达,且6拷贝质粒的重组菌表达量最高;生长曲线显示拷贝数提高未对菌体正常生长带来影响;电镜下观察到表达的Cap蛋白能够自发装配成直径约为20 nm、与天然PCV2粒子大小相当、均一的VLPs;纯化后的VLPs免疫接种小鼠后能有效刺激机体产生PCV2抗体。含多拷贝数表达质粒的工程菌可显著提高重组毕赤酵母中Cap的表达量。

• 单位
  上海海利生物技术股份有限公司